Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病患进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到肾脏自身突变到注意到1同型癌症流行病学呕吐的困难重重不下在成年人时期就有很好的刻画，多个肾脏自身突变阴性的成年人中都有70%在血清转换后10年内患上癌症，而随访15年的成年人这一数目缩减到84%。比较之下，分之二流行病学1同型癌症一半以上的同型1同型癌症的发病前提还没有得到充份的研究成果。

越来越多的人开始适用仍须系统来下定义1同型癌症的困难重重：小团纤在注意到多种肾脏自身突变时转至第1过渡期，注意到胰岛素异常时转至第2过渡期，注意到呕吐时转至第3过渡期。一些多发肾脏自身突变阴性的小团纤，在1期和2期，困难重重较慢，并发展为发病的1同型癌症。我们之前刻画了一第一组在首次检查和到多种肾脏自身突变样品后数10年无癌症的正因如此慢困难重重者，这第一组病症人口数少，但基本特征非常明确。随后，我们发现肾脏自身受体依赖性CD8+T巨噬细胞反应当在困难重重平稳的病症中都基本不普遍存在，但在近期发病和仍然普遍存在的癌症病症中都很容易检查和到。这似乎表明，与困难重重病症比较，这些病症免疫系统当的调节增强。

早期研究成果表明，尽管调节性T巨噬细胞(Treg)数量正常人，但癌症病症普遍存在一些系统原因，其中都之外对IL-2的反应当并能减低。此外，癌症病症中都的畸变CD4+T巨噬细胞似乎对调节更具抵抗性，表现为畸变T巨噬细胞的抑制作用消退，纯净产生的Treg和纤外产生的诱发Treg，以及受体经历的CD4+T巨噬细胞中都IL-2反应当消退。本研究成果的目地是刻画了CD4+调节性T巨噬细胞(Treg)在一个大正因如此平稳困难重重者中都的基本特征，他们的岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

工具：BOX研究成果是一项以人群辅以的主干研究成果，在21岁以下复发的病症亲属中都检查和1同型癌症的脆弱原因。我们之前刻画了仍然平稳困难重重者的基本特征，他们始终保持多重肾脏自身突变阴性将近10年，但没有注意到癌症的流行病学呕吐，慢性或非透过性免疫。随后，10名继续始终保持无癌症并乐意提供大量血清样品的平稳困难重重者设为T和B巨噬细胞系统研究成果。在现阶段的研究成果中都，8名慢困难重重者(SP第一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的肾脏自身突变阴性。所有的旁观者都东南面1同型癌症困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身突变对某些受体的橘红色，然而，一名病症已经东南面2期数6年，但没有注意到流行病学呕吐，一名病症被诊断为癌症，该病患72岁，在采集实验样品时，其HbA1c消退到53 mmol/mol(7%)，在数据研究成果中都对该ADP透过了直接评估。分离外周血单个核巨噬细胞(PBMCs)，采用多实例流式巨噬细胞心法和T巨噬细胞抑制作用试验车评估ADP中都Treg的Hz、表同型和系统。适用FlowSOM和CITRUS(聚类深入研究成果、表征和重归)透过无督导聚类研究成果，评估Treg表同型。

结果：与健康ADP比较，来自慢困难重重纤的思绪CD4+T巨噬细胞的督导聚类表明，触发的思绪CD4+ TregHz缩减，与糖皮质激素诱发的TNFR相关受体(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c消退的病症与困难重重平稳者和匹配的相符合第一组比较，Treg谱有所各有不同。系统研究成果表明，与健康ADP比较，来自平稳困难重重纤的Treg内源性的CD4+畸变T巨噬细胞抑制作用明显受到破坏。表现为对畸变CD4+T巨噬细胞CD25和CD134理解的抑制作用缩减。

上图1 系统地的表同型研究成果表明，CD4+Treg亚同型在慢困难重重描述符中都缩减。由FlowSOM生成的Treg过道，涌进在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据上标物理解深入研究成果出10个元簇:思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)适用9个各有不同Treg上标生成的10个元簇的MST。每个键值代表一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在键值第一组附近上色。每个键值中都的饼上图回应当单个上标的理解高至。(b)每个元聚类的热上图，以表明整纤上标理解。(c, d)为HD第一组(c)和SP第一组(d)生成上图，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较轻元素为每个metacluster箱子曲新线上图(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP第一组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T巨噬细胞(l)。粉红色橘色代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 适用CITRUS的预测模同型得出结论，TregHz的缩减是困难重重平稳的标志。分级依赖型(a - f)和甜菜研究成果(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l小团纤的传奇色彩上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解透过分离，模拟FlowSOM小团纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)第一组以及ADPSP 606(粉红色)中都CD25+ cd127的Hz统计上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型姪集的箱子曲新线上图;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，箭头值得注意的簇被识别为SP和HD描述符间的各有不同。(j)箱子曲新线上图表明了在SP(蓝点)和HD(灰点)第一组中都，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的比较轻元素(数目)。(k)直方上图表明每个簇的表同型(粉红色)和Treg上标比较理解与背景理解(黄色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中都上标的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩检验

上图3 与健康献血者比较，困难重重平稳者思绪treg的GITR缩减。每个思绪CD4+T巨噬细胞元簇(思绪T巨噬细胞_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +思绪T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查和每个理解上标的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的理解热上图(sp606不之外在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR理解相联，表明直方上图(c)和统计上图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有ADP之外，p< 0.05(黄色)ADPSP 606和匹配的HD不之外在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从分级依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(黄色)和SP 606(粉红色)相联，表明直方上图(e)和统计上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩检验

上图4 来自平稳困难重重的CD4+ treg巨噬细胞高度集中畸变CD4+T巨噬细胞的并能减低。SP第一组用黄色的新线和橘色回应当，HD第一组用黄色的新线和橘色回应当，粉红色的新线/橘色回应当ADPsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(应当答者)被上标为CFSE, Treg按辨别的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培育出3几天后透过流式巨噬细胞心法检查和。(a-d)与CD4+应当答者比较应当的treg培育出(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应当答者培育出。(a,b,f) CFSE凋亡(a,e)和CFSE抑制作用%-(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用%-。适用阴性相符合(触发的响应当巨噬细胞仅有treg)推算抑制作用%-。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 畸变CD4+T巨噬细胞对平稳困难重重的T巨噬细胞还原的抑制作用更敏感。SP第一组用黄色的新线和橘色回应当，HD第一组用黄色的新线和橘色回应当，粉红色的新线/橘色回应当ADPsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞透过分选。CD4+CD25−(应当答者)被cfsel上标，treg按辨别的数目氢氧化钠。用抗CD3 /28微珠还原巨噬细胞，培育出3几天后透过流式巨噬细胞心法(CD25反染)和巨噬细胞因姪研究成果。HD Treg与HD、SP或sp606应当答者共同培育出。(a,b) CFSE凋亡(a)和CFSE抑制作用百分不下(b)。(c,d) CD25抑制作用百分不下(c)和CD134抑制作用百分不下(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

推论：我们得出的推论是，来自平稳困难重重姪的还原思绪CD4+Treg在GITR理解中都得到了扩展和非常丰富，强调了进一步研究成果Treg在1同型癌症几不下小团纤中都的差异性的必要性。

原意出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28